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展開劑的選擇:TLC與HPLC相比,一個突出的優點就是流動相的選擇具有更大的靈活性,流動相的選擇的目的是使絕大部分樣品的Rf值位于0.1-0.7之間并達到較好的分離,與此對應的是流動相要有適當的強度和組成。流動相強度越大,溶質Rf值越大,但很可能降低分離能力;另外單一溶劑很難分離較復雜的混合物、根據相似相溶原理,要使用多元溶劑體系。一般展開劑體系選擇如下:根據分離樣品性質、薄層色譜板性質選擇一個二元溶劑體系,通過調節溶劑比例以尋求適合Rf值,適合的Rf值找到后,再尋求極性參數相同的二元溶劑體系兩個,以這三個組成為三點組成一個三角形,則可看到:三角形頂點是二元體系,邊是三元體系,三角形內是四元體系,并且極性一致,可根據幾何原理得出任一點組成,這種方法較為直觀,也較簡單。
理想的顯色希望靈敏度高,斑點顏色穩定、斑點與背景間的對比度好,斑點的大小及顏色的深度與物質的量成正比,在樣品組成并不完全已知的情況下,通用顯色方法顯得尤為重要,通用顯色方法主要有:
紫外照射法:方便、不破壞樣品;碘蒸氣法:通用性強,與紫外法結合靈敏度高于該兩法單獨使用;熒光試劑:制造熒光背景,使原來紫外下無熒光物質被鑒別,有熒光物質更明顯;
展開劑選擇的大概原則:選擇展開劑一般要用混合溶劑:一般要有一種對所要展開樣品溶解度較大的溶劑,視樣品的極性,再選用相應的體系 。
極性小的用乙酸乙酯:石油醚;系統極性較大的用甲醇:氯仿系統;極性大的用甲醇:水:正丁醇:醋酸系統;拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸。
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