色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此可以說擔負分離作用的色譜柱是色譜系統的心臟。能否找到合適的色譜柱,關系到整個分析工作的成敗。目前市場上反相色譜柱有C18、C4、C8、C30、氰基柱、硅膠柱、氨基柱、苯基柱等。濟南色譜級N,N二甲基乙酰胺彪仕奇為收集總結了一些注意事項,希望對大家有所幫助。
C18色譜柱的選擇主要要考慮兩點,柱子規格和柱填料對色譜柱的影響。
C18柱選用的原則:
1、在pH值正常范圍內(2~8)可選用現代高純硅膠色譜柱,具有峰形好,重現性高和壽命長的特點,選用較短的柱子可以提高分離效率,選用較長的柱子可以增加保留,選用小顆粒度的填料可以提高分離度,對分子量大的組分宜選用大孔徑填料的色譜柱。
2、分離極性大的組分(流動相水相過大)采用AQ類似的色譜柱。
3、選用經過烷基化處理封口的填料可防止堿性化合物的拖尾現象。
3、選用含碳量高的柱子,增加保留值。
4、選用較短的柱子(如15cm,7.5cm)。
5、選用小顆粒度的填料。
6、對分子量大的組分選用大孔徑填料的柱子。
色譜柱使用過程中壓力升高的原因
如果壓力升高,一種可能是燒結濾片被堵塞,這時應更換濾片或將其取出進行清洗;另一種可能是大分子進入柱內,使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現塌陷,死體積增大。在后兩種情況發生時,小心擰開柱接頭,用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度(注意把被污染填料取凈)再把柱內填料整平。然后用適當溶劑濕潤的固定相(與柱內相同)填滿色譜柱,壓平,在擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善,但是很難恢復到新柱的水平。
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