濟南色譜級乙酸乙酯彪仕奇帶大家了解過柱子時需注意的操作小技巧。對于學有機的人來說,“過柱子”幾乎是無人不知無人不曉無人不會的基礎技能,你可以理解為不同的物質在同一個介質中跑的速度不一樣,所以跑久了就會有個一二三名,我們就可以根據濾出的先后順序來把他們分離出來,聽起來似乎很簡單,但別說是有機合成的新人,就是前輩們往往也會抹一把辛酸淚。過柱子是非常累和枯燥的一件事,但是又是幾乎每個大有機方向的科研人員和研究生都逃不開的一件事。
柱子是有機實驗室非常關鍵的東西,很多時候只有過完柱子、得到純凈的產品之后才能說明整個反應有意義。同時過柱子又是一個十分費時費精力的工作:一根柱子普遍需要過數個小時甚至更長時間。例如最多幾百毫克產物,最后也需要至少一個上午的時間才能完整的過完一根柱子;如果是更加復雜的天然提取物的分離工作,那么一根柱子過幾天都是經常會有的事情。
雖然耗時這么長,也并不意味著你可以把柱子放那兒不管然后自己去干別的——柱子必須要一直盯著才行。你需要隔一段時間點板(TLC,薄層色譜)來看現在柱子里出來的東西到底是什么:有的時候前面一個組分和后面一個組分之間就差那么四五滴,你要是錯過了,那就可能全白費了,尤其是對那些試管不多,習慣用燒瓶或者錐形瓶接產品的實驗室。
裝柱
柱子下面的活塞一定不要涂潤滑劑,會被淋洗劑帶到產品中的,可以采用四氟節門的。干法和濕法裝柱覺得沒什么區別,只要能把柱子裝實就行。裝完的柱子應該要適度的緊密(太密了淋洗劑走的太慢),一定要均勻(不然樣品就會從一側斜著下來)。書中寫的都是不能見到氣泡,我覺得在大多數情況下有些小氣泡沒太大的影響,一加壓氣泡就全下來了。當然如果你裝的柱子總是有氣泡就說明需要多練習了。但是柱子更忌諱的是開裂,甭管豎的還是橫的,都會影響分離效果,甚至作廢!
加樣
用少量的溶劑溶樣品加樣,加完后將下面的活塞打開,待溶劑層下降至石英砂面時,再加少量的低極性溶劑,然后再打開活塞,如此兩三次,一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗劑,一開始不要加壓,等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離(2~4cm就夠了),再加壓,這樣避免了溶劑(如二氯甲烷等)夾帶樣品快速下行。
淋洗劑的選擇
感覺上要使所需點在rf0.2~0.3左右的比較好。不要認為在板上爬高了分的比較開,過柱子就用那種極性,如果rf在0.6,即使相差0.2也不容易在柱子上分開,因為柱子是一個多次爬板的狀態,可以通過公式的比較:0.6/0.8一次的分離度,肯定不如(0.2/0.3)的三次方或四次方大。
樣品的收集
用硅膠作固定相過柱子的原理是一個吸附與解吸的平衡。所以如果樣品與硅膠的吸附比較強的話,就不容易流出。這樣就會發生,后面的點先出,而前面的點后出。這時可以采用氧化鋁作固定相。
另外,收集的試管大小要以樣品量而定,特別是小量樣品,如果用大試管,可能一根就收到了三個樣品。如果都用小試管那工作量又太大。
最后的處理
柱分后的產品,由于使用了大量的溶劑,其中的雜質也會累積到產品中,所以如果想送分析,最好用少量的溶劑洗滌一下,因為大部分的雜質是溶在溶劑里的,一洗基本就沒了,必要時進行重結晶。
另外,再過柱的時候,有時會出現氣泡,一是和使用的溶劑有關,如果是易揮發的溶劑,因此,在室溫高的時候,可以選擇沸點較高,揮發相對小的溶劑。還有,使用混合溶劑時,使用的兩種溶劑的沸點應該相差不大,如:乙酸乙酯和石油醚(60~90),卻要選擇30-60的石油醚。二是:不論是用帶砂板的還是塞棉花的,在裝柱之前,都要將空氣用加壓的方法將空氣排干,這樣就可避免柱中有空氣!
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