在層析技術(shù)發(fā)展之初,對于一些物質(zhì)的分離方式都處在比較原始的狀態(tài),并且分離的結(jié)果也并不是很理想。
bio-rad專家談到層析技術(shù)最初是在1903~1906年由俄國植物學(xué)家M.Tswett首先提出來的。
那時,他將葉綠素的石油醚溶液倒入碳酸鈣管柱,并繼續(xù)以石油醚淋洗,由于碳酸鈣對葉綠素中各種色素的吸附能力不同,所以色素被逐漸分離,在管柱中出現(xiàn)了不同的色譜圖。于是就稱這種混合物的分離方法為,有色的圖譜法(Chromato+graphy),簡稱色譜法,又叫層析法。不過,當(dāng)時這種方法并未引起人們的注意。
接下來隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展以及生產(chǎn)實踐的需要,層析技術(shù)也得到了迅速的發(fā)展。這里就不得不提到兩位在層析技術(shù)發(fā)展史上做出重要貢獻(xiàn)的人,他們是英國生物學(xué)家馬丁(Martin)和辛格(Synge)。是他們首先提出了色譜塔板理論。
色譜塔板理論其實是基于熱力學(xué)近似的理論,這個理論中涉及的對象有目標(biāo)分離物,色譜柱。這里色譜柱好比是一個分餾塔。理論是這樣的:將目標(biāo)分離物倒入“分餾塔”,這樣就會在分餾塔板間移動,在每一個塔板內(nèi)組分分子在固定相和流動相之間形成平衡,隨著流動相的流動,組分分子不斷從一個塔板移動到下一個塔板,并不斷形成新的平衡。一個色譜柱的塔板數(shù)越多,則其分離效果也就越好。這個分離過程提升分離效率,并且定量的進行描述,分析這個分離過程。
這是個進步,并且馬丁(Martin)和欣革(Synge)還提出更為遠(yuǎn)見卓識的預(yù)言:1、流動相可用氣體代替液體,因為與液體相比,分離時候,物質(zhì)間作用力更小,對分離也就更有好處。2、若能夠使用非常細(xì)的顆粒填料,并在色譜柱兩端施加較大的壓差,從而增加了理論培板數(shù),這將會大大提高分離效率。
發(fā)展期
上世紀(jì)60、70年代是色譜/層析技術(shù)快速發(fā)展的時代,首先是層析介質(zhì)有了飛速的發(fā)展,各種人工合成的介質(zhì)出現(xiàn),如硅膠、聚苯乙烯二乙烯基樹脂、瓊脂糖、葡聚糖、聚丙烯酰胺等樹脂或凝膠的出現(xiàn),極大地拓展了層析技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域和范圍,基于不同介質(zhì)的層析方法也如雨后春筍般不斷涌現(xiàn)。